重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶。它是胰蛋白酶的一種形式，是在實(shí)驗(yàn)室中合成的，而不是從動(dòng)物來源（例如豬或牛的胰腺）中提取的。冀百康生物——重組胰蛋白酶，在整個(gè)生產(chǎn)流程中，嚴(yán)格避免了使用任何動(dòng)物源性原材料，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，確保了該重組胰蛋白酶產(chǎn)品的安全性、高純度及超高比活等特性。

*動(dòng)物源與非動(dòng)物源胰蛋白酶的對(duì)比

重組胰蛋白酶具有許多潛在用途，包括應(yīng)用于在醫(yī)藥開發(fā)、用作研究工具以及生物技術(shù)應(yīng)用，例如蛋白類藥物的生產(chǎn)、細(xì)胞消化、疫苗生產(chǎn)以及用于細(xì)胞分析的組織樣本的制備等，總體而言，重組胰蛋白酶在生物制藥和科研領(lǐng)域是不可或缺的關(guān)鍵酶。

*酶

為滿足下游企業(yè)在生物藥以及科研領(lǐng)域的不同應(yīng)用需求，冀百康生物提供出四款級(jí)別的重組胰蛋白酶可供選擇，分為重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶、重組胰蛋白酶（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）、重組胰蛋白酶（藥典級(jí)）、重組胰蛋白酶（1:250）。

*冀百康重組胰蛋白酶

*具體產(chǎn)品信息可聯(lián)系業(yè)務(wù)人員。

選型指南

面對(duì)多種多樣的重組胰蛋白酶，下游如何選購才更精準(zhǔn)？請(qǐng)參考冀百康生物為您提供的詳盡選型指南。

01 應(yīng)用于細(xì)胞消化，疫苗生產(chǎn)

重組胰蛋白酶（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）

重組胰蛋白酶（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）在疫苗生產(chǎn)的環(huán)節(jié)中作為細(xì)胞消化的工具介入，尤其是貼壁依賴型動(dòng)物細(xì)胞的消化。在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，使用重組胰蛋白酶（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行處理，能夠快速水解細(xì)胞間的沾粘蛋白，釋放出單個(gè)獨(dú)立細(xì)胞。高純度的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)無雜蛋白/雜酶等，可以減少對(duì)細(xì)胞的非特異性影響，提高消化過程的特異性和溫和性，保持細(xì)胞的完整性和細(xì)胞活性。同時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)具有超高的比活性，能提升消化效率，更快速地處理細(xì)胞樣本。

* 胰蛋白酶消化前后對(duì)比

（來源：分析測(cè)試百科網(wǎng)《細(xì)胞消化的小技巧》）

● 不含凍干保護(hù)劑，高純度 (SDS-PAGE) ≥95%，蛋白含量≥90%；

● 更高比活性，通常≥4500USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA

02 應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析與純化

重組胰蛋白酶（藥典級(jí)）

重組胰蛋白酶（藥典級(jí)）符合美國(guó)藥典USP42和中國(guó)藥典2020版中重組胰蛋白酶相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，更適合常規(guī)的蛋白質(zhì)分析與純化。藥典級(jí)純度≥95%，可以精準(zhǔn)快速地將大分子的蛋白質(zhì)的切割成較小的片段或肽鏈，避免雜質(zhì)或其他蛋白質(zhì)影響，提高蛋白質(zhì)的純度。另外，藥典級(jí)超高比活的優(yōu)勢(shì)，可在較短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)完全酶解，減少樣品的周轉(zhuǎn)時(shí)間，加快蛋白質(zhì)分析與純化過程；減少了非特異性切割和酶自身降解的可能性，從而保證了蛋白類藥物的質(zhì)量和均一性。

*蛋白質(zhì)全譜分析示意圖 

（來源：武漢國(guó)家級(jí)人類遺傳學(xué)資源庫)

● 含凍干保護(hù)劑，高純度≥95%，蛋白含量＞50%；

● 更高比活性，通常≥5000USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA

03 應(yīng)用于生物藥物生產(chǎn)，如胰島素

重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶

重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶因其在高溫條件下依舊維持活性的特性，可完美規(guī)避在使用重組胰蛋白酶過程中反復(fù)凍融而造成的損耗。本品不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。與重組豬胰蛋白酶等不同，該重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶不易自切，配制為細(xì)胞消化液后可在2-8℃穩(wěn)定存放，在胰島素的生產(chǎn)過程中，重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶常用于胰島素前體蛋白的酶切轉(zhuǎn)換步驟，將胰島素前體蛋白轉(zhuǎn)化為活性胰島素。重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶的高熱穩(wěn)定性和高比活性有助于在溫和的條件下進(jìn)行高效酶切，減少副產(chǎn)物的生成。

*人胰島素、甘精胰島素和谷賴胰島素的前-胰島素原的主要胰蛋白酶切割位點(diǎn)圖。

(來源：冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)

● 高純度≥95%，蛋白含量＞30%

● 不易自切，穩(wěn)定性較高

● 更高比活性，通常≥2500USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA

04 應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細(xì)胞解離

重組胰蛋白酶（1:250）

重組胰蛋白酶（1：250）具有良好的消化性，可以有效地破壞細(xì)胞粘附和從組織中解放細(xì)胞，常應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細(xì)胞解離。1：250中含有EDTA，能抑制金屬依賴性酶，促進(jìn)細(xì)胞間連接的破壞，加快組織細(xì)胞剝離。

*動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程

(來源：生物器材網(wǎng)《哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程&培養(yǎng)條件》)

# 應(yīng)用案例 

推薦使用方法

重組胰蛋白酶（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）

● 溶液配制：重組胰蛋白酶室溫下融化，取適量胰蛋白酶，加入HBSS平衡液（或其他適宜細(xì)胞消化的緩沖液，如需要加入EDTA其終濃度推薦 0-1mM，最好不超過2mM），推薦一般使用的胰蛋白酶濃度約為 0.1-0.3mg/ml（濃度根據(jù)不同細(xì)胞進(jìn)行調(diào)整），輕柔混勻；該步驟可在室溫環(huán)境操作；

● 使用0.22μm濾膜對(duì)上述胰蛋白酶溶液過濾并轉(zhuǎn)移至無菌容器中；該步驟可在室溫環(huán)境操作；

● 過濾后的胰蛋白酶溶液應(yīng)在當(dāng)天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化細(xì)胞）

重組胰蛋白酶（藥典級(jí)）

● 蛋白質(zhì)的準(zhǔn)備——將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl，pH8.0的溶液中。

● 酶液準(zhǔn)備——稱取所需的酶粉，用10mM HCl 溶解，使酶液濃度為1-10mg/ml。

● 反應(yīng)條件——酶量：目的蛋白（質(zhì)量比）=1:50-1:1000，最適pH為7.0~9.0

重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶

● 蛋白酶切

1）將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl（pH7.0-10.0）緩沖液中。

2）將酶粉用1mM HCl（或25mM Tris-HCl，pH8.0）溶解，使酶液濃度為1-10mg/ml。

3）按照酶量：目的蛋白=1mg:50mg-1mg:500mg，或者酶量：目的蛋白=10U:1mg-100U:1mg,在pH 7.0-10.0條件下酶切。

● 細(xì)胞消化

1）取酶粉，用HBSS平衡液（或其他適宜細(xì)胞消化的緩沖液，如需要加入 EDTA 其終濃度推薦0-1mM，最好不超過2mM），配制為蛋白濃度0.1-0.3mg/ml（或者酶活濃度300U/ml-1000U/ml）的消化液，輕柔混勻。

2）使用 0.22μm 濾膜對(duì)上述胰蛋白酶溶液過濾并轉(zhuǎn)移至無菌容器中。

3）該消化液可當(dāng)天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化細(xì)胞），也可在2-8℃條件下保存30天。（若需在2-8℃保存更長(zhǎng)時(shí)間，可購買我公司產(chǎn)品TrypRE select。或與我公司技術(shù)人員聯(lián)系。）

重組胰蛋白酶（1:250）

● 取0.25g重組胰蛋白酶（1：250）粉末，加入100ml HBSS平衡鹽溶液制成0.25%的溶液，在室溫下攪拌溶解約 10min。

● 用磷酸和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.4-7.8之間，用0.22μm膜過濾，置于-20℃下保存。

# 說明：

1、處理難消化細(xì)胞，可配制為 0.4-1.0%溶液。

2、HBSS平衡鹽溶液配方：400mg/L KCl，60mg/L KH2PO4，350mg/LNaHCO3，8000mg/LNaCl，121mg/L Na2HPO4·12H2O，1000mg/L葡萄糖

*參考文獻(xiàn)

1.《中國(guó)藥典》2020版——重組胰蛋白酶檢測(cè)要求公示

2.冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)